Za uveljavitev mora Lizbonsko pogodbo sedaj ratificirati vseh 27 držav članic, bodisi v parlamentu bodisi na referendumu. Ciljni datum za začetek veljavnosti pogodbe je 1. januar 2009, tako da bi se njene določbe lahko uporabile za volitve v Evropski parlament junija 2009. Dokler ne bodo postopka ratifikacije Lizbonske pogodbe zaključile vse države članice, bo delovanje EU še naprej urejala Pogodba iz Nice, iz leta 2003.
Državni zbor Republike Slovenije je Lizbonsko pogodbo ratificiral na seji 29. januarja 2008. Slovenija je spremljanje ratifikacije Lizbonske pogodbe uvrstila tudi med prednostne naloge njenega predsedovanja EU v prvi polovici leta 2008 in si kot predsedujoča Svetu Evropske unije prizadeva za čim hitrejšo ratifikacijo nove pogodbe. S tem želi dati pozitiven zgled ostalim državam članicam Evropske unije. Lizbonska pogodba namreč ne pomeni zgolj novega napredka v poglabljanju evropske integracije, temveč nacionalnim parlamentom prinaša nove pristojnosti, saj jim omogoča neposreden vpliv na izvajanje in oblikovanje skupnih politik Evropske unije.
Lizbonsko pogodbo je doslej kot prva od držav članic EU 18. decembra 2007 v parlamentu ratificirala Madžarska. Način ratifikacije določa sicer ustavni sistem posamezne države članice in je v različnih državah različen. Na spletni strani z informacijami o Lizbonski pogodbi lahko po posameznih državah članicah preverite kakšen postopek ratifikacije predvideva.